潮霉素B Hygromycin B類型

我司提供兩種產品形式的潮霉素B。
 

一(yi)種(zhong)以凍(dong)干(gan)粉形(xing)式提(ti)供，貨(huo)號分別為(wei)：MS0003-1G，MS0003-5G，MS0003-10G。需要配制成儲存(cun)液后備用(yong)。

一種以溶于PBS的無菌液體形式提供，貨號為MS0003-20ML，使用更簡單方便。
 

潮霉素B Hygromycin B產品特性
1）   化學名：O-6-Amino-6-deoxy-L-glycero-D-galacto-heptopyranosylidene-(1-2-3)-O-β-D-talopyranosyl(1-5)- 2-deoxy-N3-methyl-D-streptamine
2）   同義(yi)名：Hygromycin B, from Streptomyces hygroscopicus 潮霉(mei)(mei)素質B，來源于吸水鏈霉(mei)(mei)菌

3）   CAS NO：31282-04-9

4）   分子式：C20H37N3O13

5）   分(fen)子量：527.53 g/mol

6）   外觀(guan)：類白(bai)色至白(bai)色粉末

7）   純度：≥90%（HPLC）

8）   效價：≥1050 U/mg

9）化學結構：

 

使用方法
1、   儲(chu)存液制備

1）潮霉素B（粉末形(xing)式）：稱取適量粉末溶于1×PBS配制(zhi)成50mg/ml溶液，用(yong)0.22μm濾(lv)膜(mo)過濾(lv)除菌，置于2-8°C避光保存(cun)。

2）潮霉素B（溶液形式）：已是無菌儲存液，直接用細胞培養液稀釋到工作濃度即可使用。

2、   建議工作濃度

潮霉素B用來篩選穩定轉染細胞株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化。1） 哺乳動物細胞 使用濃度為50-1000 μg/ml，常用篩選濃度為200 μg/ml，zuijia濃度需要殺滅曲線來確定2） 植物細胞 常用濃度：20-200 μg/ml；
3）   細菌常用濃度：20-200 μg/ml；
4）   真菌 常用濃度：200-1000 μg/ml；
 

3、殺滅曲線的建立

建議初次實驗一定要建立殺滅曲線（kill curve），至少設立5個濃度，篩選到適合自身實驗體系的zuijia濃度。
1）   將未轉化細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，鋪足夠的孔以保證后續的梯度實驗。37℃培養過夜；【注意】：對于需要更高密度以保證活力的細胞，增加接種量。
2）   第二日，用含梯度濃度潮霉素B的培養基替換舊培養基。比如，哺乳動物細胞常用濃度為50-1000μg/ml，可設50, 100, 250, 500, 750, 1000μg/m這6個濃度，各3個平行。同時設置一陰性對照，3個平行。
3）   接下來每3-4日更換新鮮的含抗生素培養基。
4）   按照固定周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉化細胞生長的恰當濃度。選擇在理想天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的zui低濃度為穩定轉染細胞篩選所需的工作濃度。
 

4、穩轉細胞的篩選
1）   轉染48h后，用含zuijia篩選濃度潮霉素B的培養基進行細胞傳代。【注意】：細胞處于活躍狀態時抗生素的殺傷效果。當細胞密度過高，篩選效率會降低。為了得到較好的篩選效果，建議將細胞稀釋至豐度不超過25%。
2）   每3-4日更換新鮮的含抗生素培養基。
3）   篩選7天后觀察并評估細胞集落的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這些取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。
4）   挑取5-10個抗性克隆到35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5）   之后換用正常培養基培養即可。
 

注意事項

為了您的安全和健(jian)康(kang)，請穿實驗服(fu)并戴一次性手套操作。

 Hygromycin B 潮霉(mei)素B

產品標簽

Hygromycin B潮霉素(su)B；50mg/ml；Hph 潮霉素(su)磷酸轉(zhuan)移酶；遺傳霉素(su)G418；Blasticidin S 殺稻(dao)瘟菌素(su)（滅瘟散）；Zeocin博(bo)萊(lai)霉素(su)；CAS：31282-04-9

產品信息

產品描述
潮霉素B（Hygromycin B），從吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）分離到的一種氨基糖苷類抗生素。通過與30S核糖體亞基結合，誘導對mRNA模板的錯讀且抑制易位，從而以阻止蛋白合成。潮霉素B能殺死細菌、真菌和高等真核細胞。主要用來篩選和維持培養穩定轉染Hph載體的原核細胞或真核細胞（植物細胞和哺乳動物細胞）。
 

對潮(chao)霉(mei)(mei)(mei)素B（Hygromycin B）的(de)抗性(xing)來(lai)源(yuan)于大腸(chang)桿菌潮(chao)霉(mei)(mei)(mei)素抗性(xing)基因(yin)（hph或hyg），該基因(yin)能編碼(ma)潮(chao)霉(mei)(mei)(mei)素磷酸(suan)轉移酶(mei)（hygromycin phosphotransferase），使得(de)潮(chao)霉(mei)(mei)(mei)素B發生(sheng)磷酸(suan)化從而(er)失去活性(xing)。目前(qian)Hph抗性(xing)基因(yin)主要有(you)兩種來(lai)源(yuan)，zui初來(lai)源(yuan)是(shi)大腸(chang)桿菌（Escherichia coli），另(ling)一來(lai)源(yuan)是(shi)潮(chao)霉(mei)(mei)(mei)素B產生(sheng)菌吸水鏈霉(mei)(mei)(mei)菌（Streptomyces hygroscopicus）。如今(jin)，攜(xie)帶Hph抗性(xing)的(de)載體大多來(lai)自大腸(chang)桿菌。