LysoSensor Green DND-189 綠色溶酶體熒光探針

產品信息

產品描述

為滿足研究者研究活細胞內溶酶體生成和功能的動力學特征，特此開發Lysosensor探針，一種區分酸性細胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針，由于質子化聚集在酸性細胞器上。這一質子化也使得因弱堿性側鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放，促使熒光信號增強。因此，LysoSensor探針遇酸后熒光信號呈現pH依賴性的增強。

LysoSensor Green DND-189（綠色溶酶體探針）可用于測量溶酶體等酸性細胞器的 pH 值。LysoSensor 染料在酸性環境下的熒光會增強。LysoSensor™ Green DND-189 的 pKa 為大約5.2。

本品為DMSO儲存液，濃度為1mM。用于活細胞的溶酶體染色，建議工作濃度為≥1µM，需根據實際情況做優化調整。

產品特征

1） 外觀：溶液

2） 濃度：1mM in DMSO

3） 亞細胞定位：溶酶體

4） 顏色：綠色

5） 檢測儀器：熒光顯微鏡

6） Abs（nm）：443

7） Em（nm）：505

8） 化學結構式：

保存與運輸方法

保存：≤-20oC避光干燥保存，收到貨至少12個月有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 整個染色過程中需注意避光。

2） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡單低速離心使溶液降至管底。第一次使用請將本品按單次用量分裝保存，≤-20°C避光干燥保存，盡量避免反復凍融。最佳工作濃度需根據不同的實驗要求、細胞類型、細胞或組織的膜通透性等進行優化。

1. 工作液的配制
利用生長培養基或合適的緩沖液將 1mM 儲存液稀釋至工作濃度，工作液需現配現用。對于 Lysosensor系列溶酶體探針，推薦工作液濃度≥1µM；
【注意】：

1）為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

2）若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育，會觀察到熒光信號的衰減和細胞的空泡化現象。

2. 染色步驟（貼壁細胞）
1）將細胞置于培養皿中的蓋玻片上，加入合適培養基，使其爬片生長。
2）待細胞生長到合適密度，吸除培養液，加入適量 37℃預熱的含探針培養基（必須完*-全覆蓋住細胞），在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h（具體孵育時間需根據細胞類型而定）。
3）利用不含探針的新鮮培養基替換上述染色液，并且用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間，使得染料能聚集在溶酶體上。

3. 染色步驟（懸浮細胞）
1）離心沉淀細胞，吸除上清。
2）利用適量 37℃預熱的含探針培養基重懸細胞，在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h（具體孵育時間需根據細胞類型而定）。
3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養基重懸細胞。
4）用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間，使得染料能聚集在溶酶體上。
【注意】：

另一種方法，懸浮細胞可能會粘附到經 BD Cell-Tak 處理的蓋玻片上，此時，可用類似于貼壁細胞的方法進行染色。

附錄I 溶酶體探針總表

溶酶體系列探針常見問題

1. 如何選擇合適的溶酶體探針？

答：對于溶酶體定位實驗，請選擇Lysotracker系列探針，根據自身的實驗體系，結合lysotracker系列探針的熒光特征，選擇合適激發和發射波長的熒光探針。Lysotracker Blue DND-22（MX4320-50UL）探針的光量子產率偏低，建議在非熒光選擇受限的情況下，推薦選擇其他幾款Lysotracker探針。對于酸性細胞器（比如溶酶體）的pH測定實驗，請選擇Lysosensor系列探針。

2. 溶酶體探針染色后是否能做固定？

3. 溶酶體探針是否能用于流式分析和熒光光度計分析？

4. 溶酶體探針LysoTracker Green DND-26（MX4318-50UL） 和LysoSensor Yellow/Blue DND-160

（MX4316-50UL）的建議孵育時間多少？

LysoSensor Green 綠色溶酶體熒光探針

 LysoSensor Green 綠色溶酶體熒光探針