LysoSensor Yellow/Blue DND-160 黃/藍色(se)溶酶(mei)體(ti)熒光探針(zhen)      

產(chan)品信息

產品描述(shu)

為滿足研究者(zhe)研究活細胞內(nei)溶酶體生(sheng)成(cheng)和功(gong)能的動力學特(te)征，特(te)此開發Lysosensor探針，一(yi)種區分酸性細胞器的熒光pH指示劑。該系列染(ran)料(liao)屬于(yu)向酸性探針，由于質子(zi)化(hua)聚(ju)集在酸(suan)性細胞器(qi)上(shang)。這一(yi)質子化也(ye)使得因弱堿(jian)性側鏈(lian)而封閉(bi)熒(ying)光的探針(zhen)得以熒(ying)光釋放(fang)，促使熒(ying)光信(xin)號(hao)增(zeng)強。因此，LysoSensor探針遇酸后熒光(guang)信號(hao)呈(cheng)現pH依(yi)賴性的增強。

LysoSensor Yellow/Blue DND-160（黃/藍色溶酶(mei)體探針）是一種獨*-特的(de)比率型探針，呈現pH依(yi)賴性的(de)雙(shuang)激發和(he)雙(shuang)發射(she)光譜峰（見(jian)Fig 1）。然而，活細(xi)胞中這(zhe)一探針僅呈(cheng)現pH依賴的雙發(fa)射(she)光(guang)譜（發(fa)射(she)波長(chang)比率~450/510 nm，激(ji)發波長~365 nm）。在酸(suan)性細胞器中，LysoSensor Yellow/Blue DND-160主要呈現(xian)黃色熒(ying)光，而在(zai)酸(suan)性(xing)偏低的細胞(bao)器(qi)(qi)中(zhong)具(ju)有藍色熒(ying)光。雙發(fa)射波長的測定(ding)允許比(bi)率成像分析(xi)在(zai)酸(suan)性(xing)細胞(bao)器(qi)(qi)比(bi)如：溶酶體(ti)或(huo)精子頂體(ti)內的pH。其pKa值約(yue)為(wei)4.2。LysoSensor Yellow/Blue DND-160，常常簡(jian)寫成(cheng)PDMPO，普遍用作海洋硅藻中(zhong)二(er)氧化硅沉(chen)積和運輸的(de)一種示蹤(zong)劑(ji)。

Fig 1. LysoSensor Yellow/Blue DND-160的pH依(yi)賴性光譜反應圖（A）熒光(guang)激發光(guang)譜（B）熒(ying)光發射(she)光譜(pu)。

本品為DMSO儲存液(ye)，濃度為(wei)1mM。用于活(huo)細胞的溶(rong)酶體染色，建議工(gong)作濃(nong)度為≥1µM，需(xu)根(gen)據(ju)實際情況做優化(hua)調整。

產品(pin)特(te)征

1） 外觀：溶液

2） 濃(nong)度：1mM in DMSO

3） 亞細胞定位：溶酶(mei)體

4） 顏色：黃色、藍色

5） 檢測儀器(qi)：熒光顯(xian)微鏡

6） Abs（nm）：329，384nm [最大(da)雙吸收波長(chang)，對pH敏感，見(jian)Fig 1]

7） Em（nm）：440，540nm [最大雙發射波長(chang)，對pH敏感，見Fig 1]

保存與運輸方(fang)法

保存：≤-20oC避光干燥保存，收到貨(huo)至少12個月有效。

運(yun)輸：冰(bing)袋運輸。

注意事項

1） 整個染色(se)過(guo)程中需注意避(bi)光。

2） 為了您的安(an)全和健康(kang)，請(qing)穿(chuan)實驗服并(bing)戴一(yi)次性手套操作。

使(shi)用方(fang)法

使用前，先將本品取出回(hui)溫(wen)至室溫(wen)，并(bing)對(dui)其(qi)進行簡單低速離心使溶液降至管底。第一次使用(yong)請將本(ben)品按單次用(yong)量(liang)分裝保存，≤-20°C避(bi)光干燥保存，盡量(liang)避(bi)免反復凍融。最佳工(gong)作濃(nong)度需根據不(bu)同的實驗(yan)要求、細胞類型、細胞或組織的膜通透性等進行優化。

1. 工作液的配制(zhi)
利用生(sheng)長(chang)培(pei)養基(ji)或合適的緩沖(chong)液(ye)將 1mM 儲存液稀釋至工作濃度，工作液需現配現用。對于 Lysosensor系列溶酶體探針，推薦工作液濃度≥1µM；
【注意】：

1）為了降低(di)探針加載過度(du)可能引起的(de)假陽(yang)性(xing)，建議(yi)在不影響(xiang)染色效果的(de)情(qing)況下盡量使用低(di)濃度(du)。

2）若細胞(bao)在染(ran)(ran)色后于不含染(ran)(ran)料的(de)培養基中(zhong)孵育，會觀察(cha)到(dao)熒光信號的(de)衰減和細胞(bao)的(de)空泡化現象。

2. 染(ran)色步驟（貼壁細胞）
1）將細胞置(zhi)于培(pei)養皿中的蓋玻片上，加入(ru)合(he)適培(pei)養基(ji)，使其(qi)爬片生長。
2）待細胞生長(chang)到合適(shi)密度，吸(xi)除培養液，加入適(shi)量(liang) 37℃預(yu)熱的含探(tan)針(zhen)培養基（必須完*-全(quan)覆蓋住(zhu)細胞(bao)(bao)），在(zai)適合(he)特(te)定(ding)細胞(bao)(bao)類型的生長條件下孵育細胞(bao)(bao)30min-2h（具體(ti)孵(fu)育時間需(xu)根(gen)據細胞類型而(er)定）。
3）利用不含(han)探(tan)針(zhen)的新鮮培(pei)養基替換上述染色(se)液，并(bing)且用裝(zhuang)有合適(shi)濾片的熒光顯(xian)微(wei)鏡進行(xing)觀察。若染(ran)色不夠充(chong)分，建議增加染(ran)料(liao)濃(nong)度(du)或延長(chang)染(ran)色時間，使得染料(liao)能聚集在溶酶體上。

3. 染色(se)步驟（懸浮(fu)細胞）
1）離心沉淀(dian)細胞，吸(xi)除上清。
2）利用適量 37℃預(yu)熱的含探(tan)針培養基重懸細胞，在適(shi)合特定細胞類型的生長條(tiao)件下(xia)孵育細胞30min-2h（具體(ti)孵育時間(jian)需根據細胞類型(xing)而定）。
3）離心，吸(xi)除染色液，加入(ru)新鮮培(pei)養(yang)基重懸細胞。
4）用裝有合適濾片的(de)熒(ying)光顯微鏡(jing)進行觀察。若(ruo)染(ran)色不(bu)夠(gou)充(chong)分，建議增加染(ran)料濃(nong)度(du)或(huo)延長染(ran)色時間，使得染料能聚集在溶酶(mei)體上(shang)。
【注意】：

另一種方法(fa)，懸浮細胞可(ke)能會粘(zhan)附到經 BD Cell-Tak 處理的蓋玻片上，此時，可用(yong)類似(si)于貼(tie)壁細胞的方法進行染(ran)色。

附錄I 溶酶體探針總(zong)表

溶酶(mei)體(ti)系(xi)列探針常見問(wen)題

1. 如何選擇合適(shi)的溶(rong)酶體探針？

答(da)：對于(yu)溶酶體定位實(shi)驗，請(qing)選擇Lysotracker系列(lie)探(tan)針，根據自身的實驗體系，結合lysotracker系列探針的(de)熒光特征，選(xuan)擇合適激發(fa)和發(fa)射波長的(de)熒光探針。Lysotracker Blue DND-22（MX4320-50UL）探針的光(guang)量子(zi)產(chan)率偏低，建議(yi)在非熒光(guang)選(xuan)擇受(shou)限的情況下(xia)，推薦選(xuan)擇其他(ta)幾(ji)款Lysotracker探針。對于酸(suan)性細胞器（比如溶酶體(ti)）的pH測定實驗，請(qing)選(xuan)擇Lysosensor系列探針。

2. 溶酶體探針染(ran)色后是否能做固定？

3. 溶酶體(ti)探(tan)針是否能用于流式分(fen)析(xi)和熒光光度計分(fen)析(xi)？

4. 溶酶體探針(zhen)LysoTracker Green DND-26（MX4318-50UL） 和LysoSensor Yellow/Blue DND-160

（MX4316-50UL）的(de)建議孵育時(shi)間多(duo)少(shao)？

LysoSensor Yellow/Blue DND-160生化試劑

LysoSensor Yellow/Blue DND-160生化試劑