TG1 Chemically Competent Cell  

大(da)腸桿菌化學感受態細胞(bao)

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菌株描述

TG1來(lai)源于(yu)E. coli K-12菌株(zhu)(zhu)，是目前生長速度最快(kuai)的(de)(de)克隆(long)用大腸桿(gan)菌菌株(zhu)(zhu)。F′附加體(ti)上的(de)(de)lacIq的(de)(de)存(cun)在(zai)使(shi)其能嚴謹(jin)型(xing)調(diao)控表達含大腸桿(gan)菌啟(qi)動子（由(you)lac操縱子序列(lie)控制(zhi)，比如：T5，trc，tac）的(de)(de)載體(ti)。TG1是常用的(de)(de)噬菌體(ti)展示(shi)用菌株(zhu)(zhu)，也適用于(yu)普通質粒(li)的(de)(de)構建，lacIqZΔM15的(de)(de)存(cun)在(zai)使(shi)其可用于(yu)藍(lan)白斑篩(shai)選等實(shi)驗。

TG1菌株基因型：F’ [traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15] supE thi-1 Δ(mcrB-hsdSM)5(rK-mK-) Δ(lac-proAB)

產品描述

本品是(shi)大腸桿菌TG1菌株(zhu)經(jing)特殊(shu)工(gong)藝(yi)制作所得的感受(shou)態(tai)細胞，可用于DNA的熱(re)擊(ji)轉化。經(jing)pUC19質(zhi)粒檢測轉化效(xiao)率可達(da)1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能(neng)穩(wen)定保存幾個月轉化效(xiao)率不發生改變(bian)。

產品包裝

保存與運輸條件：

保(bao)存：-80℃保(bao)存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態細(xi)胞(bao)必須用干(gan)冰運輸，感受態細(xi)胞(bao)應在-80℃保存。

2） 感受態細胞(bao)最好在(zai)冰上(shang)融化，不可在(zai)冰上(shang)放置時(shi)間(jian)過長，長時(shi)間(jian)存放會降低轉化效率。

3） 進行轉化操(cao)作時(shi)，需在相應溫度及(ji)無菌條件下進行。

4） 為防止轉化實驗不成(cheng)功，可保留部(bu)分連接反應液以重新轉化，將損失降到最*-低(di)。

5） 產品包(bao)裝(zhuang)內含(han)質(zhi)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供(gong)對照實驗用。

6） 后續進行陽性菌落(luo)的擴繁和高純(chun)質粒的獲取，推薦選用TB培養基（Terrific Broth），優于LB或SOC。

7） TG1菌株不含(han)核酸酶(mei)(mei)endA1突變，體內(nei)核酸酶(mei)(mei)含(han)量較高(gao)，質(zhi)粒(li)提(ti)取(qu)時，推(tui)薦使(shi)用質(zhi)粒(li)提(ti)取(qu)試劑盒中的去蛋白液(ye)，為求去除菌體內(nei)大量的核酸酶(mei)(mei)。

8） 為了您的安全和健康，請(qing)穿(chuan)實(shi)驗服(fu)并戴一次性(xing)手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1） 從-80℃冰箱(xiang)取(qu)出取(qu)感受態細胞，迅速置(zhi)(zhi)于冰浴中，5min后(hou)待菌(jun)塊融化，加入目(mu)的DNA（質粒或連接(jie)產(chan)物），用(yong)手輕(qing)(qing)彈管底輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)混勻（避免用(yong)槍(qiang)吸打(da)），冰浴靜置(zhi)(zhi)25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅(xun)速將離(li)心管轉(zhuan)移到冰浴中，冰上(shang)靜(jing)置2min。此過程不要(yao)搖動離(li)心管。

3） 向每個(ge)離心管中(zhong)加700 μl無菌的(de)(de)2YT或(huo)LB培養基（不含(han)抗(kang)生(sheng)素），混(hun)勻后(hou)置于37℃搖床，200 rpm振(zhen)蕩培養60min，目的(de)(de)使質粒(li)上相關的(de)(de)抗(kang)性標記基因表達，使菌體復蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含所選質粒篩選抗生(sheng)素的2YT或LB固(gu)體(ti)瓊脂培(pei)養(yang)基上(shang)，用無菌(jun)的涂布棒將(jiang)細胞均勻(yun)涂開，將(jiang)平板置(zhi)于室溫(wen)（或37℃）直至(zhi)液體(ti)被吸收，倒置(zhi)培(pei)養(yang)，37℃培(pei)養(yang)過夜（12-15h）。

【注意】：

a）涂布用量(liang)(liang)可(ke)根據(ju)具體實驗調整(zheng)。若轉(zhuan)(zhuan)化的DNA總(zong)量(liang)(liang)較多，可(ke)不用離(li)心(xin)，直接(jie)取少量(liang)(liang)轉(zhuan)(zhuan)化產物涂布平(ping)板(ban)；反之(zhi)，若轉(zhuan)(zhuan)化的DNA總(zong)量(liang)(liang)較少，則通過離(li)心(xin)（5000 rpm，1min）后吸除部分培(pei)養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平(ping)板(ban)中(zhong)。原則是以在平(ping)板(ban)上能挑到單克(ke)隆菌落為宜。

b）新(xin)制備(bei)的固體培養(yang)基(ji)不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸(xi)收后再倒(dao)置培養(yang)。

c）涂布(bu)剩(sheng)余的(de)菌(jun)液可置于4℃保(bao)存(cun)，如果(guo)次日的(de)轉(zhuan)化(hua)菌(jun)落數過少，可以將剩(sheng)下(xia)的(de)菌(jun)液再涂布(bu)新培(pei)養基進(jin)行(xing)培(pei)養。

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Chemically 大腸桿菌 生化試劑

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