SYTOX Green Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO)

死細胞綠色熒光(guang)核酸(suan)染(ran)料

產品關鍵詞：

SYTOX Green；SYTOX 9；碘化丙啶 PI；死(si)細胞染(ran)料(liao)綠菁；熒光增白劑28；Calcofluor White M2R；CFW；

產品信息

產品描述

SYTOX Green核酸染料（SYTOX Green Nucleic Acid Stain），是(shi)一種高(gao)親和力(li)的核酸染料，輕易(yi)滲透進入受損的細(xi)胞(bao)質膜，但不能穿(chuan)透活細(xi)胞(bao)膜。特別適用于革蘭氏陽性菌（G⁺）和革(ge)蘭氏陰性菌（G^-），由于它們需(xu)要極(ji)其明亮的(de)熒(ying)光信(xin)號(hao)。探(tan)針只需(xu)簡單孵育，使用氬離(li)子激(ji)光器的(de)488nm激光或任何其(qi)它450-490nm光源激(ji)發，死細胞(bao)的核(he)酸則呈(cheng)明亮的綠色熒光。結合以(yi)(yi)上(shang)特(te)征，以(yi)(yi)及熒光增強＞500倍（與核酸結合）的優點，使其稱為一種簡單、定量的(de)一步法死細胞(bao)指示劑，當用(yong)熒(ying)光顯微鏡、熒(ying)光光度計(ji)、熒(ying)光酶標板和流式細胞(bao)儀檢測。

SYTOX Green核(he)酸染(ran)料可與藍色和紅色熒光(guang)的表面標記聯合(he)使用，用于多指標分析。也(ye)能將SYTOX Green與任一種具(ju)細胞滲(shen)透性的SYTO 59-64紅色(se)熒(ying)光核(he)酸染料聯(lian)合雙色(se)標記死(si)細胞(bao)和活細胞(bao)。SYTOX Green是一種優秀的DNA復(fu)染(ran)劑，用于(yu)染(ran)色體標記以及(ji)固定細胞(bao)和組(zu)織的染(ran)色。

本品以DMSO儲存液形式提(ti)供，濃度為5mM。只需用(yong)合適的生理緩沖液稀釋(shi)到工作濃度進(jin)行簡(jian)單孵育(yu)即可。適用(yong)于哺(bu)乳動(dong)物細胞、革蘭(lan)(lan)氏(shi)陽性(xing)和革蘭(lan)(lan)氏(shi)陰性(xing)菌(jun)。

產品特性

1） 同義名：SYTOX Green dye；SYTOX Green死細(xi)(xi)胞染料；死細(xi)(xi)胞染料綠菁(jing)；SYTOX Green細(xi)(xi)胞核染料；

2） 外觀：橙色(se)(se)至紅色(se)(se)溶液

3） 熒光特征：E_X/E_m=504/523nm（與DNA結合(he)），熒光產量為0.53（圖1），需注意細(xi)菌或(huo)哺乳(ru)動物細(xi)胞中SYTOX Green的光譜(pu)特(te)征可能(neng)發生變(bian)化(hua)。

圖1. SYTOX Green與(yu)DNA結合(he)的熒(ying)光激發和發射光譜。于(yu)10mM Tris-HCl，1mM EDTA, pH 7.5
的反應體(ti)系內，將1個(ge)染料分子與50個(ge)DNA堿(jian)基對結合之后檢測所得的(de)光(guang)譜。

保存(cun)與運(yun)輸方法

保存:-20℃避光干燥保存(cun)，至少(shao)1年有(you)效。

運輸：冰(bing)袋(dai)運輸。

應(ying)用(yong)示例
文獻(xian)來源1）A Double Staining Method Using SYTOX Green and Calcofluor White for Studying Fungal Parasites of Phytoplankton Mélanie Gerphagnon, Delphine Latour, Jonathan Colombet, Télesphore Sime-Ngando Applied and Environmental Microbiology Jun 2013, 79 (13) 3943-395
實(shi)驗目的：利用二種熒光染料（CFW+ SYTOX green）雙重標記來定量檢測孢子(zi)(zi)囊內的游動孢子(zi)(zi)含量。
實驗(yan)方法(fa)：首先，用經典的核酸染料DAPI（1 μg/ml?1）和特(te)異性染色質熒光(guang)素增白劑（calcofluor white , CFW, 2.5% v/v）。之后，結合核酸染料SYTOX green和CFW染色。SYTOX green的(de)不同濃度（0.1 μM, 0.2 μM, 和(he)0.5 μM）和(he)孵(fu)育時(shi)間（30 min，1 h）進(jin)行優化。CFW工作(zuo)濃度為2.5% (vol/vol) 。CFW要么與SYTOX green同(tong)時加入(ru)樣本(ben)，或觀察前5min再加入樣本。染色步驟和結果(guo)總結見圖1。最佳的(de)染(ran)色條件是：先用0.1 μM SYTOX green 孵育55min，再加入CFW共同(tong)孵育5min。

Fig 1. Different concentration and incubation time procedures tested for double staining method and epifluorescence microscopy observation of zoosporic content and sporangia of phytoplankton parasitic chytrid. Optimal procedures are indicated with bold characters. Bars, 10 μm.

文(wen)獻(xian)來(lai)源2）Johnson MB, Criss AK. Fluorescence microscopy methods for determining the viability of bacteria in association with mammalian cells. J Vis Exp. 2013;(79):50729.
實驗目的：使用(yong)SYTOX Green和DAPI來(lai)評估細(xi)菌活力。
實(shi)驗方法：用DAPI (10 μg/ml in Morse's Defined Medium)室溫(wen)避(bi)光標記細菌20min；用標記好(hao)*-的細菌(jun)感染24孔板內貼壁培養的細胞，不要用醛或有機溶劑來固定細胞；用MOPS/MgCl2清洗一次；用Alexa Fluor 647結合的抗(kang)體或(huo)凝集素(su)標記(ji)感興趣的細菌(jun)，室溫(wen)避(bi)光操作10min，來檢測外部細菌；吸走細胞培養基，加入SYTOX Green（0.4 μM in MOPS/MgCl2）。室(shi)溫避(bi)光(guang)孵(fu)育5min。MOPS/MgCl2清洗2次；MOPS/MgCl2再清洗1次；于30min內用(yong)熒光顯微鏡收集圖片。

Fig 2. (A-B) Mid-logarithmic phase N. gonorrhoeae was exposed to propidium iodide and SYTO9 as in protocol 1, with (A) or without (B) isopropanol treatment to kill the bacteria. Nonviable bacteria are accessible to propidium iodide and appear red. Viable bacteria are stained with SYTO9 and appear green. (C-D) Mid-logarithmic phase N. gonorrhoeae was exposed to DAPI and SYTOX Green as in protocol 2, with (C) or without (D) isopropanol treatment to kill the bacteria. Nonviable bacteria are accessible to DAPI and SYTOX Green and appear blue + green. Viable bacteria are stained with DAPI only and appear blue only.

染色(se)流程（更(geng)多內(nei)容見(jian)說明書）

以下步(bu)驟適用于任何細胞(bao)類(lei)型(xing)，需(xu)注意不(bu)同細胞(bao)類(lei)型(xing)所需(xu)的探針工(gong)作濃度范(fan)圍(wei)有差異（見(jian)表2）。生(sheng)長(chang)培養基、細胞(bao)密度、是否存在(zai)其它細胞(bao)、和其它因素都(dou)可能(neng)影(ying)響(xiang)染(ran)色。總的(de)來(lai)說，不在(zai)磷(lin)酸鹽的(de)緩沖液中(zhong)能(neng)得到最*-好*=的(de)結果。玻璃器(qi)皿(min)(min)上(shang)殘留的(de)去(qu)污劑(ji)也有(you)可能(neng)影(ying)響(xiang)許(xu)多(duo)有(you)機體的(de)真實染(ran)色，導致含或不含細胞(bao)的(de)溶液中(zhong)都(dou)能(neng)發現明(ming)亮熒光的(de)材料。確保用溫和去(qu)污劑(ji)來(lai)清(qing)洗(xi)(xi)(xi)玻璃器(qi)皿(min)(min)，用熱自來(lai)水(shui)完*-全沖洗(xi)(xi)(xi)干(gan)凈，最后用去(qu)離子水(shui)清(qing)洗(xi)(xi)(xi)數次(ci)。

注意事(shi)項

1） 熒(ying)光染料均存(cun)在淬滅問題，請(qing)盡(jin)量注意避光，以(yi)減緩熒(ying)光淬滅。

2） 為了您的安全和健康，請穿(chuan)實(shi)驗服并戴(dai)一次性手套操作。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋(mao)康所有(you)】

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SYTOX Green 死細胞綠色熒光核酸染料

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